Cannabinoid Assays in Humans (1976) [Δοκιμασίες κανναβινοειδών σε ανθρώπους]

NIDA Research Monograph 7

(Ερευνητική Μονογραφία NIDA 7)

Editor

ROBERT E. WILLETTE, PH.D.

Division of Research

National Institute on Drug Abuse

May 1976

Εισαγωγή

Αυτή η μονογραφία περιγράφει τρόπους προσδιορισμού των επιπέδων κανναβινοειδών στο ανθρώπινο σώμα μετά το κάπνισμα κάνναβης. Οι έρευνες για μια σειρά σοβαρών κοινωνικών προβλημάτων και προβλημάτων υγείας έπρεπε να περιμένουν τις βελτιώσεις αυτών των τεχνικών.

Η κυριότερη μεταξύ αυτών των ανησυχιών είναι η επίδραση του καπνίσματος κάνναβης στην οδήγηση. Αυτή η έρευνα μαζί με άλλες μπορεί τώρα να πραγματοποιηθεί με την προσδοκία πολύ πιο ακριβών ευρημάτων από ότι ήταν προηγουμένως δυνατό. Τώρα έχουμε τα μέσα όχι μόνο για την ανίχνευση κανναβινοειδών, αλλά και για να προσδιορίσουμε σε ποια ποσότητα υπάρχουν. Έτσι, μπορούμε να αρχίσουμε να καθιερώνουμε συγκεκριμένους συσχετισμούς μεταξύ των επιπέδων κανναβινοειδών και της αναπηρίας στην οδήγηση. Αυτές οι πληροφορίες είναι απαραίτητες για να ενταχθεί η κάνναβη στην εκστρατεία για την ασφάλεια των αυτοκινητοδρόμων που τώρα περιορίζεται σε μεγάλο βαθμό στο αλκοόλ.

Αυτές οι τεχνικές ανάλυσης θα είναι χρήσιμα εργαλεία για μια σειρά άλλων προβλημάτων, συμπεριλαμβανομένων απλών διαδικασιών προσυμπτωματικού ελέγχου, επιδημιολογικών μελετών, εγκληματολογικής τοξικολογίας, καθώς και για πιο θεμελιώδη φαρμακοκινητική και φαρμακολογική έρευνα. Οι εξελίξεις στην μέθοδο και τα όργανα που περιγράφονται εδώ συμβαίνουν σε μια κρίσιμη συγκυρία για την έρευνα για την κατάχρηση ουσιών, καθώς προσπαθούμε να αξιολογήσουμε τον αντίκτυπο της κάνναβης στον πολιτισμό μας.

Robert L. DuPont, M.D.

Director

National Institute on Drug Abuse

Πρόλογος

Τα τελευταία αρκετά χρόνια, υπάρχει αυξανόμενη ζήτηση για ποιοτικές και ποσοτικές αναλύσεις για τον εντοπισμό και την μέτρηση των συστατικών της κάνναβης στο ανθρώπινο σώμα. Αυτή η απαίτηση προκαλείται από την ανάγκη για τέτοιες αναλύσεις σε διάφορες ερευνητικές έρευνες που επιχειρούν να βελτιώσουν την κατανόησή μας για το πώς αυτό το πολύπλοκο φάρμακο επηρεάζει το σώμα. Εκτός από αυτά τα πιο θεμελιώδη ζητήματα, υπάρχει μια αυξανόμενη αίσθηση ότι θα απαιτηθούν κατάλληλες αναλυτικές μέθοδοι για τον προσδιορισμό της παρουσίας κανναβινοειδών σε οδηγούς για τους οποίους υπάρχουν υποψίες ότι βρίσκονται υπό την επήρεια του ναρκωτικού.

Έχουμε φτάσει τώρα σε ένα στάδιο αναζήτησης και ανάπτυξης τέτοιων μεθόδων που πολλές από αυτές μπορούν πλέον να χρησιμοποιηθούν με τρόπο ρουτίνας. Καθώς αποκτούμε εμπειρία και εμπιστοσύνη με αυτές τις μεθόδους, η εγκυρότητά τους θα καθίσταται ολοένα και καλύτερα καθιερωμένη και η δυνατότητα εφαρμογής τους σε κρίσιμες αποφάσεις θα γίνεται πιο αποδεκτή. Θα είναι προφανές κατά την αναθεώρηση των διαδικασιών που περιγράφονται εδώ ότι ορισμένες σχεδιάστηκαν για ή λόγω της πολυπλοκότητας τους είναι κατάλληλες μόνο για ερευνητικούς σκοπούς ή στην επικύρωση άλλων μεθόδων. Άλλες που περιγράφονται είναι πιο επιδεκτικές σε εφαρμογές ελέγχου ρουτίνας ή έρευνας.

Ο δρόμος προς αποδεκτές μεθόδους ήταν μακρύς και επίπονος. Οι πρώτες προσπάθειες συνέχισαν να υποφέρουν από έλλειψη επαρκούς ευαισθησίας. Τελικά μάθαμε, καθώς προχωρούσαν οι μελέτες για τη σύνθεση της κάνναβης και τον μεταβολισμό των συστατικών της, ότι το πρόβλημα της ανίχνευσης οποιουδήποτε συγκεκριμένου κανναβινοειδούς στο σώμα μετά την χρήση θα ήταν εξαιρετικά δύσκολο έργο. Το κύριο ενεργό συστατικό, η δέλτα-9-τετραϋδροκανναβινόλη (THC) κατανέμεται και μεταβολίζεται ταχέως στον οργανισμό, καθιστώντας την ποσοτικοποίηση της σημαντική πρόκληση. Τώρα είναι πολύ ευχάριστο που μπορούμε να παρουσιάσουμε μια συλλογή χειρογράφων που περιγράφουν την τεράστια πρόοδο που έχει σημειωθεί τα τελευταία χρόνια.

Οι μέθοδοι που περιγράφονται ομαδοποιούνται σε τρεις κύριες ενότητες. Οι πρώτες βασίζονται στις ολοένα και περισσότερο χρησιμοποιούμενες τεχνικές ανοσοδοκιμασίας. Γενικά, οι ανοσοδοκιμασίες προσφέρουν ταχύτητα και ευαισθησία και είναι πολύ επιδεκτικές στον έλεγχο μεγάλου αριθμού δειγμάτων. Συχνά υποφέρουν από έλλειψη εξειδίκευσης, αλλά αυτό είναι συχνά αποδεκτό εάν αντιδρούν διασταυρούμενες μόνο με μεταβολίτες της ουσίας στόχου και με καμία άλλη ουσία. Οι τέσσερις μέθοδοι που περιγράφονται βρίσκονται σε διάφορα στάδια ανάπτυξης και τελειοποίησης, και ορισμένες χρησιμοποιούνται σε διάφορες ερευνητικές μελέτες.

Οι μέθοδοι της δεύτερης ομάδας βασίζονται στην παλαιότερη τεχνολογία της χρωματογραφίας, αλλά εφαρμόζονται με αυστηρούς και καινοτόμους τρόπους για να παρέχουν τον βαθμό ευαισθησίας που απαιτείται για την μέτρηση των χαμηλών επιπέδων ουσιών και μεταβολιτών. Ελήφθησαν δύο διαφορετικές προσεγγίσεις για την μείωση της παρεμβολής στο φόντο. Χρησιμοποιώντας έναν συμβατικό αέριο χρωματογράφο, ο Dr. Garrett χρησιμοποίησε έναν υγρό χρωματογράφο υψηλής πίεσης (HPLC) για να “καθαρίσει” το δείγμα. Το όργανο δύο στηλών που σχεδιάστηκε από τον Dr. Fenimore μειώνει την προσπάθεια που απαιτείται για την προετοιμασία του δείγματος. Καθώς προχωρά η τεχνολογία στην HPLC, αυτή η μέθοδος γίνεται εξαιρετικά δημοφιλής, προσφέροντας την δυνατότητα διαχωρισμού δύσκολων μειγμάτων σε χαμηλές θερμοκρασίες. Η προσπάθεια που περιγράφεται εδώ προχωρά και παραλληλίζεται με παρόμοιες προσπάθειες που πραγματοποιούνται από τον Dr. Valentine, ως αποτέλεσμα της φασματοσκοπικής μεθόδου μάζας του έργου του.

Η τελευταία ομάδα μεθόδων χρησιμοποιούν όλες το φασματόμετρο μάζας ως ανιχνευτή για την αναγνώριση και τον ποσοτικό προσδιορισμό των κανναβινοειδών. Οι ραγδαίες πρόοδοι στην ανάπτυξη της φασματοσκοπίας μάζας την έχουν καταστήσει την μέθοδο εκλογής όσον αφορά την ευαισθησία και την εξειδίκευση. Λόγω του σημερινού μεγέθους, του κόστους και της πολυπλοκότητας του, δεν είναι ιδανική για τακτική εφαρμογή σε προληπτικό έλεγχο ρουτίνας. Ωστόσο, χρησιμοποιείται για την επικύρωση ρουτίνας άλλων μεθόδων και για την επιβεβαίωση της παρουσίας κανναβινοειδών σε δείγματα που βρέθηκαν θετικά με λιγότερο συγκεκριμένες μεθόδους διαλογής, όπως οι ανοσοδοκιμασίες. Τα έξι έγγραφα που περιλαμβάνονται αντιπροσωπεύουν μερικές από τις πιο εξαιρετικές εργασίες που έγιναν στον τομέα της φασματοσκοπικής ανάλυσης μάζας. Από τότε που ο Dr. Agurell δημοσίευσε για πρώτη φορά την μέθοδό του το 1973, έχουν γίνει τεράστια βήματα από τον ίδιο και τους άλλους που περιλαμβάνονται σε αυτή τη μονογραφία.

Τώρα νιώθουμε πολύ σίγουροι για την ικανότητά μας να συνεχίσουμε με πολλές από τις κρίσιμες μελέτες που περίμεναν αυτές τις μεθόδους.

Αυτή η συλλογή εγγράφων δεν σηματοδοτεί το τέλος του δρόμου για την ανάπτυξη κατάλληλων μεθόδων για τον ποσοτικό προσδιορισμό των κανναβινοειδών στο σώμα. Καθώς προχωρά η κατανόησή μας για τις επιπτώσεις της κάνναβης, το ίδιο πρέπει να γίνεται και με τις μεθόδους που χρησιμοποιούνται για την μελέτη της. Τώρα έχουμε μεθόδους για την μελέτη των επιπτώσεων της κάνναβης στην οδήγηση και εάν τα στοιχεία υποδεικνύουν ότι αποτελεί σημαντικό κίνδυνο, τότε μπορεί να απαιτηθεί ένας απλός, ίσως, ένας έλεγχος καθ’ οδόν. Θα μπορούσαν να αναφερθούν και άλλα παραδείγματα, αλλά αρκεί να τελειώσουμε με την αναγνώριση ενός αξιοσημείωτου επιτεύγματος σε αυτόν τον δύσκολο τομέα έρευνας και την αίσθηση ικανοποίησης που η επιμονή μας αποδίδει καρπούς.

Robert E. Willette, Ph.D.

Uivision of Research

National Institute on Drug Abuse

April 1976

Περιεχόμενα

Ποσοτικός προσδιορισμός κανναβινοειδών σε βιολογικά υγρά με ραδιοανοσοδοκιμασία

Arleen R. Chase, Paul R. Kelley, Alison Taunton-Rigby, Reese T. Jones, Theresa Harwood

Ξεχωρισμένες ραδιοανοσομετρήσεις υγρού σώματος Δ9-THC και 11-Nor-9-Carboxy-Δ9-THC

Stanley J. Gross, M.D. And James R. Soares, Ph.D.

Ραδιοανοσοδοκιμασια Δ9-τετραϋδροκανναβινόλης

Clarence E. Cook, Ph.D., Mary L. Hawes, B.A., Ellen W. Amerson, B.A., Colin G. Pitt, Ph.D., And David Williams, B.A.

Προσδιορισμός της THC και των μεταβολιτών της από ομοιογενές ένζυμο Emit® ιοανοσοδοκιμής: Μια συνοπτική έκθεση

G.L. Rowley, Ph.D., T.A. Armstrong, C.P. Crowl, W.M. Eimstad, W.M. Hu, Ph.D., J.K. Kam, R. Rodgers, Ph.D., R.C. Ronald, Ph.D., K.E. Rubenstein, Ph.D., B.G. Skeldon, And E.F. Ullman, Ph.D.

Διαχωρισμός και ευαίσθητη ανάλυση τετραϋδροκανναβινόλης σε βιολογικά υγρά με HPLC και GLC

Edward R. Garrett And C. Anthony Hurt

Προσδιορισμός της Δ9-τετραϋδροκανναβινόλης στον ορρό ανθρώπινου αίματος με χρωματογραφία αερίου δέσμευσης ηλεκτρονίου

David C. Fenimore, Ph.D., Chester M. Davis, Ph.D., And Alec H. Horn

Ανίχνευση και ποσοτικοποίηση τετραϋδροκανναβινόλης στο πλάσμα αίματος

Agneta Ohlsson, Jan-Erik Lindgren, Kurt Leander, Stig Agurell

Μια μέθοδος για την αναγνώριση των οξικών μεταβολιτών της τετραϋδροκανναβινόλης (THC) με μαζική θρασματογραφία

Marianne Nordqvist, Jan-Erik Lindgren, Stig Agurell

Ποσοτικός προσδιορισμός κανναβινοειδών σε βιολογικά δείγματα χρησιμοποιώντας αντίστοιχη αέρια χρωματογραφία / φασματομέτρηση μάζας βάσει πιθανοτήτων

Donald E. Green, Ph.D.

Ποσοτικός προσδιορισμός της Δ9- τετραϋδροκανναβινόλης σε υγρά σώματος με αέρια χρωματογραφία / χημικού ιονισμού-φασματομετρία μάζας

Ruthanne Detrick And Rodger L. Foltz

HPLC-MS προσδιορισμός της Δ9- τετραϋδροκανναβινόλης σε δείγματα ανθρώπινου σώματος

Jimmie L. Valentine, Ph.D., Paul J. Bryant, Ph.D., Paul L. Gutshall, M.S., Owen H.M. Gan, B.S., Everett D. Thompson, B.S., Hsien Chi Niu, Ph.D.

Αναλυτικές μέθοδοι για τον προσδιορισμό των κανναβινοειδών σε βιολογικά υλικά

M.E. Wall, Ph.D., T.M. Harvey, Ph.D., J.T. Bursey, Ph.D., D.R. Brine, B.S., And D. Rosenthal, Ph.D.

(το βιβλίο σε μορφή αρχείου PDF)