Endocannabinoid Signaling – Methods and Protocols (2016) [Ενδοκανναβινοειδής σηματοδότηση – Μέθοδοι και πρωτόκολλα]

Edited by

Mauro Maccarrone

Department of Medicine

Campus Bio-Medico University of Rome

Rome, Italy

Πρόλογος

Από την απομόνωση και τον χαρακτηρισμό των ενεργών φυτοκανναβινοειδών στο φυτό κάνναβης (Cannabis sativa L.), συμπεριλαμβανομένου του πιο ψυχοδραστικού συστατικού, της Δ9-τετραϋδροκανναβινόλης (THC) και μετά τον προσδιορισμό και την κλωνοποίηση του στόχου της THC, του κανναβινοειδούς υποδοχέα τύπου 1 και των ενδογενών ομολόγων της που ονομάζονται συλλογικά “ενδοκανναβινοειδή”, έχουν γίνει πολλές προσπάθειες για την μελέτη των διαφορετικών φυσιολογικών λειτουργιών που διαμορφώνονται από αυτό που είναι τώρα γνωστό ως “ενδοκανναβινοειδές σύστημα” (ΕΚΣ). Τα ενδοκανναβινοειδή είναι παράγωγα του αραχιδονικού οξέος, που μοιάζουν με άλλους διαβιβαστές λιπιδίων, όπως οι προσταγλανδίνες ή τα λευκοτριένια. Συζευγνύονται με αιθανολαμίνη για να σχηματίσουν αμίδια λιπαρών οξέων ή με γλυκερόλη για να σχηματίσουν μονοακυλογλυκερόλες, μέχρι στιγμής, η Ν-αραχιδονοϋλαιθανολαμίνη (ανανδαμίδιο, ΑΕΑ) και η 2-αραχιδονοϋλογλυκερόλη (2-AG) αντιπροσωπεύουν τα καλύτερα μελετημένα και πιο ενεργά μέλη κάθε κατηγορίας, αντίστοιχα. Τα τελευταία 20 χρόνια, ένα διαρκώς αυξανόμενο ενδιαφέρον για τις πολλαπλές δραστηριότητες των ενδοκανναβινοειδών στην παθοφυσιολογία έχει ενισχύσει την ανάπτυξη χημικών, βιοχημικών και μοριακών βιολογικών αναλύσεων για την συγκεκριμένη μέτρηση των ενδογενών επιπέδων των ενδοκανναβινοειδών, μαζί με την ειδική δραστηριότητα διαφορετικών στοιχεία του ΕΚΣ. Αυτά περιλαμβάνουν μεμβρανικούς και πυρηνικούς υποδοχείς (και οδούς σηματοδότησης αυτών), βιοσυνθετικά και υδρολυτικά ένζυμα, καθώς και μεταφορείς μεμβράνης και οξειδωτικά ένζυμα. Όχι μόνο η λειτουργική δραστηριότητα αυτών των οντοτήτων αλλά και η έκφραση γονιδίων και πρωτεϊνών τους έχει προσελκύσει την προσοχή, επειδή η ρύθμισή της έχει αναδειχθεί ως κύριος καθοριστικός παράγοντας της βιολογικής δραστηριότητας των ενδοκανναβινοειδών. Ως εκ τούτου, ένα εγχειρίδιο που συγκεντρώνει όλες τις κύριες μεθοδολογίες για την διερεύνηση της σηματοδότησης ΕΚΣ και ενδοκανναβινοειδών φαίνεται επίκαιρο και θα βοηθήσει χημικούς, σχεδιαστές φαρμάκων, βιοχημικούς, μοριακούς βιολόγους, κυτταρικούς βιολόγους, φαρμακολόγους και (ηλεκτρο)φυσιολόγους να περιηγηθούν στο τεράστιο εύρος της έρευνας για τα ενδοκανναβινοειδή.

Mauro Maccarrone

Rome, Italy

Περιεχόμενα

• 1. Ανάγκη μεθόδων για την διερεύνηση της ενδοκανναβινοειδούς σηματοδότησης, Mauro Maccarrone
• 2. Εκχύλιση και ταυτόχρονος ποσοτικός προσδιορισμός ενδοκανναβινοειδών και λιπιδίων που μοιάζουν με ενδοκανναβινοειδή σε βιολογικούς ιστούς, Laura Bindila and Beat Lutz
• 3. Προσδιορισμός 2-Αραχιδονοϋλογλυκερόλης με μSPE-LC-MS/MS, Natalia Battista and Manuel Sergi
• 4. Ανάλυση Ν-ακυλαιθανολαμινών που προέρχονται από ωμέγα-3 λιπαρά οξέα σε βιολογικές μήτρες, Renger F. Witkamp and Michiel G. J. Balvers
• 5. Προσδιορισμός δέσμευσης υποδοχέα CB1, Valeria M. Catani and Valeria Gasperi
• 6. Η δοκιμασία δέσμευσης μετατόπισης με χρήση ανθρώπινων κανναβινοειδών υποδοχέων CB2 μεταμολυσμένων κυττάρων, Maria Grazia Cascio, Pietro Marini and Roger G. Pertwee
• 7. Προσδιορισμός σηματοδότησης υποδοχέα TRPV1, Aniello Schiano Moriello and Luciano De Petrocellis
• 8. Λειτουργική Ανάλυση για τον GPR55: Πρωτόκολλο οραματισμού, Sharon Anavi-Goffer and Ruth A. Ross
• 9. Η κυκλική δοκιμασία AMP με χρήση ανθρώπινων κανναβινοειδών υποδοχέων CB2 που έχουν μεταμολυνθεί, Pietro Marini, Maria Grazia Cascio, and Roger G. Pertwee
• 10. Δοκιμασία δέσμευσης GTPγS στην αυτοραδιογραφία, Marina Gabaglio, Pamela Prini, Erica Zamberletti, Tiziana Rubino, and Daniela Parolaro
• 11. Πρωτόκολλο για τη μελέτη της πρόσληψης β-αρρεστίνης από κανναβινοειδείς υποδοχείς CB1 και CB2, Marjolein Soethoudt, Noortje van Gils, Mario van der Stelt, and Laura H. Heitman
• 12. Δοκιμασία δραστηριότητας ΝΑΤ, Toru Uyama and Natsuo Ueda
• 13. Δοκιμασία δραστηριότητας NAPE-PLD, Filomena Fezza, Nicolina Mastrangelo and Mauro Maccarrone
• 14. Προσδιορισμός της δραστηριότητας FAAH, Monica Bari, Monica Feole and Mauro Maccarrone
• 15. Προσδιορισμός δραστηριότητας NAAA, Kazuhito Tsuboi and Natsuo Ueda
• 16. Προσδιορισμός δραστικότητας DAGLα/β, Tiziana Bisogno
• 17. Δοκιμασία δραστικότητας μονοακυλογλυκερόλης λιπάσης, Kwang-Mook Jung and Daniele Piomelli
• 18. Μια ευαίσθητη και ευέλικτη ανάλυση δραστηριότητας φθορισμού για το ABHD6, Juha R. Savinainen, Dina Navia-Paldanius and Jarmo T. Laitinen
• 19. Μια ευαίσθητη και ευέλικτη ανάλυση δραστηριότητας φθορισμού για το ABHD12, Juha R. Savinainen, Dina Navia-Paldanius and Jarmo T. Laitinen
• 20. Δοκιμασία πρόσληψης ενδοκανναβινοειδών, Mark Rau, Simon Nicolussi, Andrea Chicca and Jürg Gertsch
• 21. Δοκιμασία ενδοκανναβινοειδούς οξείδωσης από κυκλοοξυγενάση-2, Shalley N. Kudalkar, Philip J. Kingsley and Lawrence J. Marnett
• 22. Οξυγόνωση ανανδαμιδίου από λιποξυγενάσες, Guus van Zadelhoff and Mario van der Stelt
• 23. Δοκιμασία ενδοκανναβινοειδούς οξείδωσης από κυτόχρωμα Ρ450, Natasha T. Snider, Vyvyca J. Walker and Paul F. Hollenberg
• 24. Αξιολόγηση γονιδιακής έκφρασης του ενδοκανναβινοειδούς συστήματος, Mariangela Pucci and Claudio D’Addario
• 25. Ανοσοαποτύπωμα (Western blot) του ενδοκανναβινοειδούς συστήματος, Jim Wager-Miller and Ken Mackie
• 26. Ποσότητα διακίνησης υποδοχέων μεμβράνης πλάσματος (συζευγμένη με πρωτεΐνη G) σε καλλιεργημένα κύτταρα, Jim Wager-Miller and Ken Mackie
• 27. Μέτρηση της αλληλεπίδρασης ΕΚΣ με βιομεμβράνες, Clotilde B. Angelucci, Annalaura Sabatucci and Enrico Dainese
• 28. Οπτικοποίηση ενδοκανναβινοειδών στο Κύτταρο, Sergio Oddi, Antonio Totaro and Mauro Maccarrone

(το βιβλίο σε μορφή αρχείου PDF)